举世医药网 > 医药资讯 > 行业新闻 > 正文 同济年夜学传授哄骗CRISPR体系发明：一种具备两重作用的卵细胞成熟因子2017/1/1����APP0 来历：生物通 浏览数：

自同济年夜学生命科学与技能学院，北京生命科学研究所等处的研究职员哄骗CRISPR/Cas9基因润色体系构建了Sall4基因前提性敲除了小鼠，从而发明SALL4能作为主要的转录因子以及表不雅遗传调控因子介入卵母细胞成熟的调控机制。

这一研究结果宣布于Journal of Biological Chemistry杂志上，研究职员运用CRISPR/Cas9基因编纂体系乐成获得了前提性基因敲除了的小鼠(Sall4loxP/loxP)以及基因荧光标志小鼠(Sall4-mCherry)，为于卵母细胞中研究Sall4基因的功效创举了有益前提。

带领这一研究的是同济年夜学高绍荣传授，陈嘉瑜助理传授为配合通信作者，第一作者为高绍荣传授课题组的硕士研究生许锴以及陈霞。高绍荣传授重要研究范畴为干细胞与体细胞重编程，哄骗体细胞核移植与引诱多能干细胞技能从事哺乳植物初期胚胎发育以及体细胞重编程份子机制与干细胞研究。

卵细胞的成熟瓜葛到受精以及初期胚胎发育的顺遂举行，是生殖医学范畴最主要的研究标的目的之一。Sall4(Splat-like 4)于许多主要的生物学进程中起到要害作用，例如，介入胚胎干细胞的干性维持、细胞重编程、原始生殖细胞发育、精原干细胞的分解。2016年高绍荣课题组与中科院生物物理研究所朱冰课题组互助，于Molecular Cell杂志上，展现了Sall4介入DNA羟基化的调控机制。

于这项研究中，研究职员起首哄骗CRISPR/Cas9基因润色体系构建了Sall4基因前提性敲除了小鼠，随后将这类小鼠与Zp3-Cre或者Gdf9-Cre小鼠举行交配、孳生以及基因型筛选获得于卵母细胞中特同性敲除了Sall4基因的母鼠。研究职员发明这类小鼠没法孕育发生成熟的卵母细胞，而且这些敲除了了Sall4的卵母细胞出现出极低程度的DNA甲基化润色以及异样紊乱的组卵白润色程度(别离是高程度的H3K27me3润色和低程度的H3K4me3润色)。

同时研究职员还发明SALL4可以或许调控与上述两种组卵白润色相干的酶——Kdm5b、Kdm6a以及Kdm6b基因的表达。他们进一步经由过程体外mRNA以及siRNA打针的要领证明了异样程度的H3K4me3以及H3K27me3润色会致使一些主要的与卵细胞成熟相干基因的异样表达，从而阐释了SALL4于卵母细胞的表不雅遗传成熟(epigeneticmaturation)上所起的主要作用。

这一研究初次不雅察到Sall4基因的敲除了可以或许影响卵母细胞中DNA甲基化的成立，而且证实组卵白润色程度的不变对于卵母细胞的转录组不变以及进一步成熟具备不成或者缺的作用。除了此以外，研究者运用了CRISPR/Cas9基因编纂体系乐成获得了前提性基因敲除了的小鼠(Sall4loxP/loxP)以及基因荧光标志小鼠(Sall4-mCherry)，为于卵母细胞中研究Sall4基因的功效创举了有益前提。

别的研究运用了单细胞RNA-seq以及单细胞RRBS等微量测序技能，从而解决了卵母细胞研究受制在细胞数目的问题。并且还运用了卵母细胞体外打针的要领，巧妙地验证了异样的组卵白润色对于卵细胞成熟的主要作用。这些要领的运用，充实揭示了新技能的孕育发生以及成长对于生命科学研究的鞭策作用。

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